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丁基疏水色譜柱在使用時有什么地方需要注意的呢?

更新時間:2021-03-12瀏覽:1063次
   丁基疏水色譜柱是一款以粒徑為2.5 um的,丁基鍵合無孔型親水性聚合物基質(zhì)為填充劑的疏水作用色譜柱。適用于蛋白質(zhì)、單抗、酶等生物大分子的分離分析。
  采用具有適度疏水性的填料,以含鹽水溶液作流動相,借助于溶質(zhì)與固定相間的 疏水相互作用實現(xiàn)分離的色譜方法。其保留機理與反相色譜基本相同,所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相強,多為低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。疏水作用色譜主要用于蛋白質(zhì)的分離與純化。
  丁基疏水色譜柱的注意事項:
  1、當使用2.1mm內(nèi)徑色譜柱時,建議優(yōu)化系統(tǒng)以減少譜帶展寬。
  2、在0.1mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱,然后在2分鐘內(nèi)將流速升至0.5mL/min。
  3、使用新鮮潔凈的水與乙腈,沖洗系統(tǒng),確保系統(tǒng)干凈,不含任何緩沖鹽和污染物。
  4、將入口端連接到系統(tǒng)上,柱出口端先不要連接,色譜柱身上有箭頭標明正確流向。
  5、重啟流速,按照步驟4的方法逐漸提高流速,至常規(guī)分析時所使用的流速。
  6、參考柱效測試報告中的方法,使用該流動相條件平衡色譜柱,通常需要使用5-10倍柱體積的流動相,直至壓力與基線穩(wěn)定。
  由于和藥物安全以及生產(chǎn)成本息息相關,對于重組蛋白藥物(包括單抗)的非均一性分析變得越來越被重視。TSKgel Butyl-NPR(4.6 mm ID X 3.5 cm)已經(jīng)上市超過20年了,它以對蛋白的高速、高分辨率的分離性能為廣大客戶提供了幫助。新上市的Butyl-NPR(4.6 mm ID X 10 cm)色譜柱具有更高的分辨率,可以滿足生物制藥的研究人員對于HPLC色譜柱的分辨率和分離選擇性的更高要求。
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