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丁基疏水色譜柱在使用時有哪些需要注意的呢?

更新時間:2020-09-21瀏覽:1564次
   丁基疏水色譜柱是一款以粒徑為2.5 um的,丁基鍵合無孔型親水性聚合物基質為填充劑的疏水作用色譜柱。適用于蛋白質、單抗、酶等生物大分子的分離分析。
  丁基疏水色譜柱的使用注意事項:
  1、使用新鮮潔凈的水與乙腈。沖洗系統(tǒng),確保系統(tǒng)干凈,不含任何緩沖鹽和污染物。
  2、取用色譜柱時避免磕碰掉落。
  3、將丁基疏水色譜柱入口端連接到系統(tǒng)上,柱出口端先不要連接,色譜柱身上有箭頭標明正確流向。
  4、在0.1mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱,然后在2分鐘內將流速升至0.5mL/min。
  5、當溶劑均勻的從柱出口端流出,停流速,將色譜柱出口端接到系統(tǒng)檢測器上(這樣可以避免氣泡進入檢測系統(tǒng),并且可快速達到基線平衡)。
  6、重啟流速,按照步驟4的方法逐漸提高流速,至常規(guī)分析時所使用的流速。
  7、參考柱效測試報告中的方法,使用該流動相條件平衡色譜柱,通常需要使用5-10倍柱體積的流動相,直至壓力與基線穩(wěn)定。
  8、測試丁基疏水色譜柱柱效。如果沒有柱效測試報告中的分析物,請廠家部門尋求支持,使用合適的濃度與進樣量。柱效結果略低于柱效測試報告屬正常情況。如結果明顯偏低、峰形拖尾,提示色譜柱和/或所使用的液相系統(tǒng)處于非理想狀態(tài),需要進行故障排查。當使用2.1mm內徑色譜柱時,建議優(yōu)化系統(tǒng)以減少譜帶展寬,包括:使用檢測器微量流通池,減少進樣器loop環(huán)體積,使用較小內徑(如0.005''或0.12mm)的系統(tǒng)管路。并確保管路與丁基疏水色譜柱連接恰當、無死體積。當使用小顆粒填料(如2.5μm)短柱進行快速分離時,需要考慮以下因素:
  1、確保管路丁基疏水色譜柱連接恰當、無死體積,盡量優(yōu)化系統(tǒng)減少譜帶展寬;
  2、提高采樣頻率至10點/秒以上;
  3、較小粒徑的色譜柱產生的柱壓較高,而較小粒徑要達到*色譜效率所需的線速度較高,請根據所用LC系統(tǒng)的實際情況調節(jié)流速;
  4、可使用較高的柱溫來補償小顆粒造成的壓力升高,例如40?C。使用雜化顆粒反相色譜柱時,可使用45?C或更高。
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